阻断抗体筛选服务

什么是阻断抗体（Blocking Antibodies）？

阻断抗体（Blocking Antibodies），也称为拮抗性抗体或功能性抗体，是能够抑制特定配体–受体相互作用或信号通路的抗体。通过阻止这些相互作用，阻断抗体有助于：

  • 理清治疗靶点的作用机制（MoA）
  • 判断候选抗体是否能中断功能性结合事件
  • 确定抗体与靶点结合的生物学相关性
  • 评估候选抗体成为治疗性拮抗剂的可能性 

阻断实验，如基于ELISA的阻断、基于细胞的流式细胞术阻断、以及SPR/BLI竞争实验，因而成为抗体药物开发中从早期发现、先导筛选到功能验证的重要工具。

阻断抗体筛选挑战

尽管阻断抗体筛选非常关键，但在内部建立这类筛选通常面临以下困难：

  • 开发周期长：构建稳定、高灵敏的阻断实验需要数周时间优化
  • 可重复性差：配体质量、抗体滴定或细胞状态的变化会导致结果不一致
  • 技术复杂：不同实验体系需要各自专业知识和设备支持
  • 高资源消耗：试剂、人工及反复优化大大增加成本
  • 缺乏经过验证的对照：没有可靠的阳性抗体难以确认实验性能

为什么选择缔码生物？

为了解决上述难题，缔码生物建立了全面的阻断抗体筛选平台，涵盖多种经过验证的靶点阻断检测，可实现快速且可靠的功能性抗体评价：

  • 多种经过验证的阻断实验方法已建立
  • 支持多种分析格式:ELISA或基于细胞的流式（FC）阻断实验
  • 高灵敏度与可重复性：每个实验使用表征良好的阳性对照以确保一致性
  • 支持高通量与多种样品类型：纳米抗体、兔/人/小鼠抗体、双特异性抗体库等

服务流程与内容

workflow for blocking antibody screening service

案例展示

IL6R blocking ELISA assay

IL6R blocking ELISA assay

Competitive ELISA showing inhibition of IL-6R–ligand binding by a tocilizumab biosimilar. Serial antibody dilutions were incubated with IL-6R-hFc, followed by IL-6-mFc-His detection. The blocking curve yields an IC₅₀ of 35.11 ng/mL.

IL7RA Blocking ELISA assay

Competitive ELISA showing inhibition of IL-7RA–ligand binding by a Bempikibart biosimilar. Serial antibody dilutions were incubated with IL-7RA-hFc, followed by biotinylated lL7-hFc detection. The blocking curve yields an IC₅₀ of 25.96 ng/mL.

已开发阻断抗体筛选方法的靶点

Target Protein Reference Antibody Method
41BBL 41BB SC113.153 ELISA
ACVR2A Activin A bimagrumab ELISA
ACVR2B Activin A bimagrumab ELISA
Canine IL31 Canine IL31RA lokivetmab ELISA
Feline IL31 Feline IL31RA dovanvetmab ELISA
CD47 SIRPα magrolimab FACS
CSF1R M-CSF cabiralizumab ELISA
DLL3 Antibody epitope competition assay tarlatamab ELISA
EGFR EGF Cetuximab ELISA
HER3 NRG1 seribantumab
patritumab		 ELISA
IL21 IL21R avizakimab ELISA
IL21R IL21 IL21R BM ELISA
Target Protein Reference Antibody Method
IL31RA IL-31 nemolizumab ELISA
IL4RA IL4 dupilumab ELISA
IL6R IL6 tocilizumab ELISA
IL7RA IL7 bempikibart ELISA
IL7RA IL7 bempikibart FACS
MET HGF emibetuzumab ELISA
OX40 OX40L KH 72577-3 FACS
PD1 PDL1 pembrolizumab ELISA
Canine PD1 Canine PDL1 INTERVET 4F12 FACS
PDL1 PD1 atezolizumab FACS
TIGIT CD155 etigilimab FACS

阻断抗体筛选服务常见问题（FAQ）

1. 阻断抗体筛选支持哪些类型的抗体样本？

我们的阻断抗体筛选服务支持多种抗体来源与格式，包括：

  • 纯化抗体：IgG、Fab、VHH（Nanobody）
  • 杂交瘤上清（Hybridoma supernatant）
  • B 细胞培养上清
  • 腹水样本（Ascites fluid）
  • 噬菌体展示抗体库（如有需要，可提供抗体表达支持）

根据样本的体积、纯度及表达形式，我们将匹配最合适的ELISA或基于细胞的阻断筛选方法，确保数据可靠性。

2. 阻断抗体筛选需要多少样本量？

不同样本类型对应的常规用量如下：

  • 纯化抗体：≥50 μg（用于初筛；IC₅₀分析阶段需更多用量）
  • 抗体上清样本：≥200μL，浓度 ≥2μg/mL
  • 腹水样本：≥200-500μL

若样本量受限，我们可提供小规模抗体表达或纯化服务，帮助项目顺利推进。

3. 阻断抗体筛选通常采用哪些实验方法？

我们根据靶点特性与应用场景，采用以下成熟方法进行功能性抗体筛选：

  • 基于ELISA的竞争性阻断实验：适用于配体-受体相互作用阻断；高通量、数据稳定，适合早期筛选
  • 基于流式细胞术（FACS）的阻断实验：在细胞表面检测抗体阻断效果；更贴近真实生物学环境

实验方案会针对每个靶点进行优化，以确保高重复性与可比性。

4. 阻断抗体活性是如何评估的？

阻断活性评估通常基于以下关键指标：

  • 阻断百分比（%Blocking/%Inhibition）
  • 剂量-反应曲线与IC₅₀数值
  • 与已知阳性对照抗体的对比分析

此外，还可根据项目需求加入功能性读出，如信号通路抑制、细胞功能或表型变化。

5. 初筛与IC₅₀分析有何区别？

  • 初筛：快速筛选具有潜在阻断活性的抗体；适用于抗体库或大量样本
  • IC₅₀分析：对命中抗体进行定量评价；判断真实阻断效力和开发潜力

二者结合，可对抗体的功能性阻断能力进行系统评估。

6. 阻断抗体筛选项目周期需要多久？

标准项目周期如下：

  • 阻断初筛：约5-10个工作日
  • IC₅₀定量分析：约7-14个工作日
  • 基于细胞的功能实验（可选）：额外1-2周

对于时间敏感项目，可提供加急筛选服务。

7. 阻断抗体筛选数据报告包含哪些内容？

标准交付的数据报告包括：

  • 初筛阶段的阻断率（%inhibition）
  • IC₅₀分析阶段的剂量-反应曲线与IC₅₀数值
  • 表位竞争/BLI数据（如适用）
  • 功能性实验数据（如已开展）
  • 实验条件、QC信息与数据说明
  • 技术总结及后续抗体开发建议

8. 是否可以进行抗体表位竞争分析？

可以。我们可通过BLI或SPR技术进行：

  • 配体竞争分析
  • 受体竞争分析
  • 抗体–抗体表位重叠评估

如需更精细的表位解析，也可引入突变体蛋白用于深入表位映射。

9. 阻断抗体筛选是否需要客户提供靶点蛋白或细胞模型？

不一定。我们可提供：多种标签形式的重组蛋白（多种常见靶点现货可用）及已建立的稳定或瞬时表达细胞系。客户也可提供自有抗原或细胞模型，用于定制化阻断筛选方案。

10. 阻断抗体筛选服务是否支持NDA保密协议？

支持。所有样本、实验流程与数据均在签署保密协议（NDA）后严格保密，确保客户项目安全。