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阻断抗体筛选服务
什么是阻断抗体（Blocking Antibodies）？
阻断抗体（Blocking Antibodies），也称为拮抗性抗体或功能性抗体，是能够抑制特定配体–受体相互作用或信号通路的抗体。通过阻止这些相互作用，阻断抗体有助于：
- 理清治疗靶点的作用机制（MoA）
- 判断候选抗体是否能中断功能性结合事件
- 确定抗体与靶点结合的生物学相关性
- 评估候选抗体成为治疗性拮抗剂的可能性
阻断实验，如基于ELISA的阻断、基于细胞的流式细胞术阻断、以及SPR/BLI竞争实验，因而成为抗体药物开发中从早期发现、先导筛选到功能验证的重要工具。
阻断抗体筛选挑战
尽管阻断抗体筛选非常关键，但在内部建立这类筛选通常面临以下困难：
- 开发周期长：构建稳定、高灵敏的阻断实验需要数周时间优化
- 可重复性差：配体质量、抗体滴定或细胞状态的变化会导致结果不一致
- 技术复杂：不同实验体系需要各自专业知识和设备支持
- 高资源消耗：试剂、人工及反复优化大大增加成本
- 缺乏经过验证的对照：没有可靠的阳性抗体难以确认实验性能
为什么选择缔码生物？
为了解决上述难题，缔码生物建立了全面的阻断抗体筛选平台，涵盖多种经过验证的靶点阻断检测，可实现快速且可靠的功能性抗体评价：
- 多种经过验证的阻断实验方法已建立
- 支持多种分析格式:ELISA或基于细胞的流式（FC）阻断实验
- 高灵敏度与可重复性：每个实验使用表征良好的阳性对照以确保一致性
- 支持高通量与多种样品类型：纳米抗体、兔/人/小鼠抗体、双特异性抗体库等
服务流程与内容
案例展示
IL6R blocking ELISA assay
Competitive ELISA showing inhibition of IL-6R–ligand binding by a tocilizumab biosimilar. Serial antibody dilutions were incubated with IL-6R-hFc, followed by IL-6-mFc-His detection. The blocking curve yields an IC₅₀ of 35.11 ng/mL.
IL7RA Blocking ELISA assay
Competitive ELISA showing inhibition of IL-7RA–ligand binding by a Bempikibart biosimilar. Serial antibody dilutions were incubated with IL-7RA-hFc, followed by biotinylated lL7-hFc detection. The blocking curve yields an IC₅₀ of 25.96 ng/mL.
已开发阻断抗体筛选方法的靶点
| Target | Ligand/Receptor | Reference Antibody |
| 41BBL | 41BB | SC113.153 |
| ACVR2A | Activin A | bimagrumab |
| ACVR2B | Activin A | bimagrumab |
| CD47 | SIRPα | magrolimab |
| CSF1R | M-CSF | cabiralizumab |
| EGFR | EGF | Cetuximab |
| HER3 | NRG1 | seribantumab |
| patritumab | ||
| IL21 | IL21R | avizakimab |
| IL21R | IL21 | ATR 107 |
| IL31RA | IL-31 | nemolizumab |
| Target | Ligand/Receptor | Reference Antibody |
| IL4RA | IL4 | dupilumab |
| IL6R | IL6 | tocilizumab |
| IL7RA | IL7 | bempikibart |
| IL7 | bempikibart | |
| MET | HGF | emibetuzumab |
| OX40 | OX40L | KH 72577-3 |
| PD1 | PDL1 | pembrolizumab |
| PDL1 | PD1 | atezolizumab |
| TIGIT | CD155 | etigilimab |
| Canine PD1 | Canine PDL1 | INTERVET 4F12 |
| Canine IL31 | Canine IL31RA | lokivetmab |
| Feline IL31 | Feline IL31RA | dovanvetmab |
阻断抗体筛选服务常见问题（FAQ）
1. 阻断抗体筛选支持哪些类型的抗体样本？
我们的阻断抗体筛选服务支持多种抗体来源与格式，包括：
- 纯化抗体：IgG、Fab、VHH（Nanobody）
- 杂交瘤上清（Hybridoma supernatant）
- B 细胞培养上清
- 腹水样本（Ascites fluid）
- 噬菌体展示抗体库（如有需要，可提供抗体表达支持）
根据样本的体积、纯度及表达形式，我们将匹配最合适的ELISA或基于细胞的阻断筛选方法，确保数据可靠性。
2. 阻断抗体筛选需要多少样本量？
不同样本类型对应的常规用量如下：
- 纯化抗体：≥50 μg（用于初筛；IC₅₀分析阶段需更多用量）
- 抗体上清样本：≥200μL，浓度 ≥2μg/mL
- 腹水样本：≥200-500μL
若样本量受限，我们可提供小规模抗体表达或纯化服务，帮助项目顺利推进。
3. 阻断抗体筛选通常采用哪些实验方法？
我们根据靶点特性与应用场景，采用以下成熟方法进行功能性抗体筛选：
- 基于ELISA的竞争性阻断实验：适用于配体-受体相互作用阻断；高通量、数据稳定，适合早期筛选
- 基于流式细胞术（FACS）的阻断实验：在细胞表面检测抗体阻断效果；更贴近真实生物学环境
实验方案会针对每个靶点进行优化，以确保高重复性与可比性。
4. 阻断抗体活性是如何评估的？
阻断活性评估通常基于以下关键指标：
- 阻断百分比（%Blocking/%Inhibition）
- 剂量-反应曲线与IC₅₀数值
- 与已知阳性对照抗体的对比分析
此外，还可根据项目需求加入功能性读出，如信号通路抑制、细胞功能或表型变化。
5. 初筛与IC₅₀分析有何区别？
- 初筛：快速筛选具有潜在阻断活性的抗体；适用于抗体库或大量样本
- IC₅₀分析：对命中抗体进行定量评价；判断真实阻断效力和开发潜力
二者结合，可对抗体的功能性阻断能力进行系统评估。
6. 阻断抗体筛选项目周期需要多久？
标准项目周期如下：
- 阻断初筛：约5-10个工作日
- IC₅₀定量分析：约7-14个工作日
- 基于细胞的功能实验（可选）：额外1-2周
对于时间敏感项目，可提供加急筛选服务。
7. 阻断抗体筛选数据报告包含哪些内容？
标准交付的数据报告包括：
- 初筛阶段的阻断率（%inhibition）
- IC₅₀分析阶段的剂量-反应曲线与IC₅₀数值
- 表位竞争/BLI数据（如适用）
- 功能性实验数据（如已开展）
- 实验条件、QC信息与数据说明
- 技术总结及后续抗体开发建议
8. 是否可以进行抗体表位竞争分析？
可以。我们可通过BLI或SPR技术进行：
- 配体竞争分析
- 受体竞争分析
- 抗体–抗体表位重叠评估
如需更精细的表位解析，也可引入突变体蛋白用于深入表位映射。
9. 阻断抗体筛选是否需要客户提供靶点蛋白或细胞模型？
不一定。我们可提供：多种标签形式的重组蛋白（多种常见靶点现货可用）及已建立的稳定或瞬时表达细胞系。客户也可提供自有抗原或细胞模型，用于定制化阻断筛选方案。
10. 阻断抗体筛选服务是否支持NDA保密协议？
支持。所有样本、实验流程与数据均在签署保密协议（NDA）后严格保密，确保客户项目安全。
