无标签重组蛋白更加接近蛋白的天然形式，能够减少亲和标签对蛋白结构、生物活性及分子相互作用的潜在影响，适用于药物研发、疫苗研究、结构生物学及高通量筛选等研究领域。
然而，与带标签蛋白相比，无标签蛋白通常缺少可直接用于亲和纯化的通用位点，部分蛋白在去除标签后还可能出现稳定性或溶解性下降等问题，因此对表达体系、标签设计、酶切条件及后续纯化工艺提出了更高要求。
缔码生物采用可切除亲和标签技术路线：在蛋白表达阶段引入合适的融合标签，以提高蛋白表达和亲和纯化效率；完成初步纯化后，再使用特异性蛋白酶精准切除标签，并通过二次纯化获得高质量无标签重组蛋白，从而兼顾蛋白制备效率与最终产品的天然属性。
| Protease | Cleavage Site | Note |
|---|---|---|
| HRV 3C Protease | LEVLFQ/GP | Widely used for its specificity and efficiency. |
| Enterokinase | X-Asp-Asp-Asp-Asp-Lys-â-Not Proline-X | Ideal for removing tags like the FLAG tag. |
| SUMO Protease | Recognize the tertiary structure of SUMO | Highly specific for the SUMO protein fusion, |
| TEV Protease | ENLYFQG/S | Known for high specificity. |
| Thrombin | LVPR/GS | Commonly used in many expression systems. |
| Factor Xa | IEGR or IDGR | cleavage site can easily be inserted between a tag sequence and the protein of interest. |
1. 什么是无标签重组蛋白？
指最终交付的蛋白不含His、Fc、GST、SUMO等融合标签，更接近天然蛋白状态。
2. 为什么选择无标签蛋白？
可减少外源标签对蛋白构象、生物活性及分子相互作用的潜在影响，适合药物筛选、结构研究和蛋白互作分析。
3. 无标签蛋白如何制备？
通常先表达带可切除标签的融合蛋白，经亲和纯化后进行酶切，再通过二次纯化获得无标签目标蛋白。
4. 为什么不直接表达无标签蛋白？
直接表达的蛋白缺少通用亲和纯化位点，纯化难度较高；可切除标签方案能够兼顾表达、纯化效率和最终蛋白质量。
5. 可以使用哪些标签切除酶？
可选择HRV 3C、TEV、SUMO Protease、Enterokinase、Thrombin及Factor Xa等，具体方案需根据蛋白序列和下游应用确定。
6. 采用什么表达系统？
缔码生物采用哺乳动物细胞表达体系，有利于复杂蛋白正确折叠、翻译后修饰及生物活性保持。
7. 如何保证标签切除后的纯度？
酶切后通过二次纯化去除游离标签、残留蛋白酶、未切割融合蛋白及其他杂质，并进行PAGE、Western Blot等质量检测。
8. 定制服务包括哪些环节？
包括方案设计、基因合成与载体构建、蛋白表达、亲和纯化、标签切除、二次纯化、质量检测及成品交付。
9. 项目评估需要提供什么信息？
建议提供蛋白名称、物种、氨基酸序列或表达区间、目标产量、纯度要求、缓冲液要求及下游应用。
We have been using DIMA’s protein preparation service for several projects, and the results have been outstanding. The proteins were not only high quality but also maintained their biological activity, which is essential for our assays. The fast turnaround time and the expertise of their staff made collaboration easy and efficient. I highly recommend their services to any researcher looking for reliable and efficient protein preparation.
