PeptiNanodisc-膜蛋白相关细胞实验最优解

膜蛋白，尤其是多穿膜蛋白如GPCR家族、离子通道蛋白等，在膜运输、信号转导、细胞稳态和能量代谢等生理过程中扮演重要角色。尽管这些蛋白质非常重要，但由于其存在多个疏水区，如何获得稳定且不聚集的天然构象膜蛋白仍然是其靶向药开发的一大难点。

去垢剂是全长膜蛋白表达纯化最早解决方案。去垢剂是一类两亲性分子，具有疏水端和亲水端，可以将磷脂中的膜蛋白替换出来，从而实现膜蛋白可溶。但去垢剂本身具有毒性，其存在会损害膜蛋白的结构与活性，同时也限制了膜蛋白的下游应用。基于此，研究人员又进一步开发了去垢剂的替代方案-纳米圆盘Nanodisc。Nanodisc因固定膜蛋白支架材料不同亦可进一步分为：Synthetic Nanodisc和MSP Nanodisc。MSP Nanodisc因去垢剂残留而无法用于下游细胞实验。Synthetic Nanodisc因磷脂来源于天然细胞膜也不推荐用于细胞实验。

从应用的角度出发，缔码生物经过多次尝试，开发了一种无需使用去污剂即可稳定膜蛋白的简单方法，PeptiNanodisc。PeptiNanodisc，顾名思义，是利用特殊肽段包裹住膜蛋白的疏水部分（类似于肽盘），从而保护其不受水溶液的影响。由于不存在磷脂和去垢剂，利用PeptiNanodisc平台表达出的膜蛋白可以用于细胞实验。而且，理论上肽盘可以像‘通用支架’一样，适用于各种膜蛋白，不受蛋白大小限制。

CLDN18.2 PeptiNanodisc

Protein L-647

G4S-PE

标记PeptiNanodisc，顾名思义，指的是带标记的PeptiNanodisc全长膜蛋白。不同于传统的标记蛋白，标记PeptiNanodisc是通过先标记后组装的方式，将biotin以及FITC等小分子直接偶联在多肽上，然后进行PeptiNanodisc的组装，从而得到biotin或荧光标记的膜蛋白。

利用功能ELISA分别检测液体状态和冻干粉状态下CLDN6-Strep PeptiNanodisc (FLP420008)与CLDN6抗体结合活性，结果显示EC50并无显著差异。

利用功能ELISA检测CLDN6-Strep PeptiNanodisc分别在-20℃、37℃ 24h、37℃ 48h、37℃ 72h条件下，其与CLDN6抗体结合活性，结果显示EC50并无显著差异。

通过SDS-PAGE分析发现：不同条件下（-80℃液体状态、-20℃冻干粉状态及冻干粉状态37℃分别放置24h、48h、72h），CLDN6-Strep PeptiNanodisc呈现的条带位置及丰度无明显差异。

利用功能ELISA分别检测液体状态和冻干粉状态下GPRC5D PeptiNanodisc与GPRC5D抗体结合活性，结果显示EC50并无显著差异。

利用功能ELISA检测GPRC5D PeptiNanodisc分别在-20℃、37℃ 24h、37℃ 48h、37℃ 72h条件下，其与GPRC5D抗体结合活性，结果显示EC50并无显著差异。

通过SDS-PAGE分析发现：不同条件下（-80℃液体状态、-20℃冻干粉状态及冻干粉状态37℃分别放置24h、48h、72h），GPRC5D PeptiNanodisc呈现的条带位置及丰度无明显差异。