你是否正在开发ADC？
你是否苦于缺乏高效、标准化的抗体内吞检测方法？
缔码新品：DT3C蛋白（Cat.No.AME100004），为抗体内吞效率评估提供了一种快速、可靠、通用的工具！
1. 什么是DT3C？
DT3C（Diphtheria Toxin Fragment A + Streptococcus Protein G C1-C3）是一种重组融合蛋白，融合了白喉毒素A片段（Diphtheria Toxin Fragment A ）和G链球菌来源的结构域（Streptococcus Protein G C1-C3）。
Fig 1. The struture of DT3C protein.
1.1 白喉毒素A片段–Diphtheria Toxin Fragment A
Diphtheria Toxin Fragment A (DT-A) 是白喉毒素的活性部分，具有ADP-核糖转移酶活性，是白喉毒素的毒性来源。
其作用机制为：Fragment A进入细胞后，催化NAD+中的ADP-核糖基团转移到真核细胞EF-2（elongation factor-2）上。ADP-核糖修饰导致EF-2失活，无法再参与核糖体转译过程中tRNA转位，从而抑制蛋白质合成，引起细胞死亡。
在DT3C结构中，DT-A的细胞毒性被用于：
- 功能定位：DT3C 中仅保留 Fragment A，因此其进入细胞依赖抗体介导的内吞；
- 毒性释放模拟：当抗体-DT3C复合物被靶细胞内吞之后，Fragment A可在胞内行使其毒性功能，模拟 ADC 药物在细胞内释放毒素。
1.2 转位结构域-Translocation domain
Translocation domain是指一种蛋白结构域，源自白喉毒素（Diphtheria Toxin）的中间段（T domain），能够介导蛋白质从内体等囊泡结构中穿膜进入胞质，广泛存在于某些细菌毒素（如白喉毒素、炭疽毒素）中。其在酸性环境下构象发生变化，使融合蛋白的有效载荷转移到胞质中。
1.3 G链球菌来源的Fc结合结构域–Streptococcus Protein G C1–C3
来源于G链球菌Protein G的C1–C3结构域，与IgG抗体Fc段具有高亲和力，可与其非共价结合。该结构域可与多种属（如人、鼠、兔等）IgG抗体结合，且不影响抗体的抗原结合区（Fab段）功能。
在DT3C中，C1–C3片段作为与抗体结合的部分，其功能为：
- 识别并结合抗体Fc段；
- 使DT3C蛋白稳定结合在抗体上，形成mAb-DT3C复合物；
- 利用抗体识别目标细胞，实现靶向性内吞；
综上，该蛋白的核心机制是通过与IgG抗体Fc段结合，形成mAb-DT3C复合物，当抗体被靶细胞识别之后，DT3C随之一起经内吞进入细胞，进而模拟ADC药物的细胞内毒素释放过程。
Fig 2. Working principle diagram of DT3C protein.
2. 产品优势：
- 无需化学偶联
- 兼容性多种IgG类型,利用抗体识别目标细胞，实现靶向性内吞
- 快速评估抗体内吞与毒性功能,模拟ADC机制
- 支持高通量筛选与多种细胞实验平台
Fig 3. The advantages of DT3C protein.
3. 案例展示
DiTagTM DT3C IgG labeling reagent（AME100004）
- SDS-PAGE纯度检测：
Fig 4. DT3C Protein on SDS-PAGE under reducing condition.
- 抗体内吞效率检测
采用CCK8方法检测K562-GPRC5D细胞的抑制率。GPRC5D ADC BMK的IC50为15.55ng/ml，表明其具有特异性内吞作用。
Fig 5. Cell inhibition rate of K562-GPRC5D detected by CCK8 method. The IC50 of GPRC5D ADC BMK (BME100187) is 15.55ng/ml, indicating specific internalization.
4. FAQ 快速问答
① DT3C能和哪些抗体结合？
可与人、小鼠、兔等多种物种来源的IgG类抗体结合。
② 需要偶联抗体吗？
不需要，DT3C可直接与抗体Fc段结合。
③ 能否用于活细胞实验？
可以，DT3C适用于细胞内吞实验，可评估功能性。
④ 有哪些检测方法？
可结合荧光标记、流式、显微成像或毒性分析。
⑤ 如何保存/使用？
建议-80℃保存，避免反复冻融，按SOP推荐比例与抗体孵育。