寻找在肿瘤细胞上表达，而在正常细胞上不表达或低表达的靶点对肿瘤免疫而言至关重要。ROR1是一个非常有潜力的药物靶点，它在多种实体瘤和血液恶性肿瘤中都具有差异化的高度表达，而在成人健康组织中并不表达。这意味着ROR1有望成为一个具有广谱抗癌潜力的新药靶点。
ROR1概述
ROR1（receptor tyrosine kinase-like orphan receptor 1）是一种I型跨膜蛋白，属于受体酪氨酸激酶样孤儿受体（ROR）家族。他们的命名是因为该家族的配体多年未被识别。现在已知ROR家族成员是Wnt家族信号分子Wnt5a/b和Wnt16的受体，Wnt5a为主要配体。ROR1通过与配体Wnt5a结合，介导非经典Wnt信号通路（non-canonical Wnt pathways）的信号传递。该信号参与多种细胞生理过程和多种癌症的发生和发展。
ROR1的结构
ROR1是单次跨膜受体，包含细胞外部分、跨膜部分和细胞质区域。
胞外区（ECD）又分为：免疫球蛋白样（Ig）结构域（Ig-Like），卷曲结构域（Frizzled, FZD）及环状结构域（Kringle domains, KD）。FZD通过与配体Wnt5a结合来调节非经典Wnt信号。KD介导ROR1与其他受体如ROR2的相互作用。
胞内结构域（ICD）：一个酪氨酸激酶样结构域，两个富含丝氨酸/苏氨酸结构域和一个富含脯氨酸结构域。
（数据来源：Zhao Yuming, Front Oncol, 2021）[1]
ROR1在肿瘤细胞中的高表达
ROR1在早期胚胎发育过程中高表达，并参与调节细胞分裂、增殖、迁移等，参与神经、骨骼和血管等器官的生成。伴随着胎儿发育的过程，ROR1的表达量逐渐下降。在儿童和成人阶段，ROR1在几乎所有正常组织中的表达都很低或不表达。
与正常组织相反，ROR1在多种癌症中表达，包括血液学癌症，如慢性淋巴细胞白血病(CLL)、套细胞淋巴瘤(MCL)和实体瘤（卵巢癌、乳腺癌、前列腺癌、肺癌、黑色素瘤和结肠直肠癌等）。ROR1的表达特性使得该蛋白成为癌症治疗的理想药物靶点。
ROR1信号与肿瘤发生
研究表明，肿瘤细胞中ROR1的高表达有助于提高肿瘤细胞的存活率、增殖、迁移和趋化。表达ROR1的血液和实体肿瘤具有很高的自我更新潜力，表现出更高的生存率和迁移率，并与不良预后相关。
Wnt5a-ROR1通过非典型Wnt通路参与并上调YAP/TAZ转录和/或多梳复合蛋白BMI-1表达，在肿瘤发生和耐药中发挥重要作用。
Wnt5a结合ROR1诱导细胞内信号传导，导致AKT激活增加，进而磷酸化BMI-1，促进基因组不稳定性、癌细胞增殖和耐药。
Wnt5a与ROR1/FZD复合物结合后，通过Gα12/13结合激活RhoA，抑制Lats1/2活性，从而导致YAP/TAZ去磷酸化和核转位。YAP/TAZ与TEADs结合可以诱导干细胞和肿瘤发生相关基因的转录。YAP/TAZ转录的增加，反过来上调ROR1的表达。
（数据来源：Karvonen Hanna. Cells, 2019）[2]
ROR1与肿瘤免疫
目前开发的靶向ROR1的基于抗体的免疫疗法包括ROR1单克隆抗体、抗体药物结合物(ADC)、双特异性抗体(BiTE)和嵌合抗原受体(CAR) T细胞。下面是关于ROR1靶点在临床前和临床研究的列表：
（数据来源：Zhao Yuming, Front Oncol, 2021）[1]
（数据来源：Zhao Yuming, Front Oncol, 2021）[1]抗体药物偶联物（ADC）
抗体药物偶联物(ADC)是一种靶向治疗药物，通过化学连接物将细胞毒性小分子偶联到单克隆抗体上。抗体药物偶联物可选择性地向抗原阳性的癌细胞输送有毒物质。
VLS-101（MK-2140）
2020年11月5日默克以27.5亿美元收购VelosBio，从而获得该公司主打的靶向ROR1的ADC药物VLS-101（MK-2140）。
VLS101是一款ROR1靶向ADC药物，由靶向ROR1的单克隆抗体和单甲基auristatin E (MMAE)组成，MMAE是一种通过阻断微管蛋白聚合抑制细胞分裂的药物。
VLS-101正处于临床开发，用于治疗血液系统恶性肿瘤和实体瘤患者。VLS-101发挥其作用的过程：
VLS-101抗体与癌细胞上的ROR1结合后，ADC被内化进入这些细胞并释放MMAE来摧毁癌细胞。
（数据来源：Vaisitti Tiziana. Blood, 2021）[3]
LCB71 (CS5001)
2020年10月29日基石药业以1000万美元的首付款+3.535亿美元里程碑金额引进LegoChem Biosciences靶向ROR1的ADC药物LCB71。
LCB71 (CS5001)是一款由靶向ROR1的人源单克隆抗体构成的ADC。该ADC药物具有独特的设计，通过定向偶联技术，LCB71 (CS5001)结合了特有的β-葡萄糖苷酸连接子和吡咯并苯二氮卓类（PBD）前毒素二聚体。连接子和前毒素均能被溶酶体β-葡萄糖醛酸酶切割，而β-葡萄糖醛酸酶在许多癌细胞中呈过度表达。这使得LCB71 (CS5001)只有在到达肿瘤后，其连接子被切割释放PBD前毒素，继而PBD前毒素在肿瘤细胞内被激活，从而杀死肿瘤细胞。这种连接子加前毒素的“双控”机制有效地解决了与传统PBD载荷有关的典型毒性问题，拥有更好的安全性。
LCB71 (CS5001)在Jeko-1（人套细胞淋巴瘤）和MDA-MB-231（人乳腺癌细胞）异种移植瘤模型中均表现出显著的抗肿瘤活性，且呈剂量依赖性。CS5001是一款有望在ROR1高表达的血液肿瘤和恶性实体瘤中都具有精准治疗潜力的候选药物。
NBE-002
2020年12月10日勃林格殷格翰宣布以约15亿美元的价格收购NBE-Therapeutics，从而获得NBE-Therapeutics靶向ROR1的ADC药物NBE-002。
NBE-002是一种ADC，由人源化抗体(huXBR1-402)与蒽环类药物PNU-159682的衍生物组成。HuXBR1-402是从兔抗体库中通过噬菌体展示筛选出的兔/人嵌合单抗(名为XBR1-402)。
NBE-002在乳腺癌、肺腺癌、卵巢癌和肉瘤的患者源性异种移植模型中显示出显著的抗肿瘤活性。目前该药物针对三阴乳腺癌，肺癌，卵巢癌的研究正处于临床Ⅰ期。
(数据来源：NBE-Therapeutics官网) [4]单克隆抗体药物
Zilovertamab (Cirmtuzumab或UC-961)
Zilovertamab(以前称为cirmtuzumab或UC-961)是Oncternal Therapeutics研发的靶向ROR1的单克隆抗体药物，当它与ROR1结合时，可阻断WNT5A信号传导，进而抑制肿瘤细胞增殖、迁移和存活，诱导肿瘤细胞分化。
（数据来源：Oncternal Therapeutics官网）[5]
Cirmtuzumab联合Imbruvica治疗MCL和慢性淋巴细胞白血病（CLL）正在开展I/II期临床试验中。此外，Cirmtuzumab联合紫杉醇治疗转移性乳腺癌正在开展I期临床试验。
（数据来源：Oncternal Therapeutics官网）[5]双特异性抗体
双特异性抗体包括由两个抗体衍生的单链可变片段(scFv)组成的小而灵活的分子。一只手臂与肿瘤相关抗原(ROR1 kringle域)结合，另一只手臂靶向TCR CD3亚基，引导多克隆T细胞到达肿瘤部位。
（数据来源：Amin Kamrani, Expert Opinion on Therapeutic Targets）[6]
NVG-111
NVG-111是一种首创的人源化ROR1和CD3 BiTE，是由ROR1和CD3的scFv串联而成的双特异性抗体。NVG-111靶向ROR1阳性的恶性细胞并利用T细胞固有的细胞毒作用，从而在体内和体外诱导肿瘤细胞死亡。临床前研究表明，NVG-111在CLL和实体肿瘤中具有良好的T细胞介导的细胞毒性。
下图展示了NVG-111所针对的疾病和所处的研发阶段。
（数据来源：NovalGen官网）[7]ROR1的CAR-T细胞疗法
构建靶向ROR1的CAR-T细胞疗法也可以起到针对性杀伤ROR1阳性癌细胞的作用。
ONCT-808
ONCT-808是一种由Oncternal Therapeutics公司开发的一种靶向ROR1的自体CAR-T细胞疗法，该疗法目前处于临床前开发阶段，最初可能用于血液恶性肿瘤的治疗。小分子抑制剂
由于ROR1的激酶活性长时间以来没有明确的定义，所以有关ROR1的小分子抑制剂方面的研究较少。尽管如此，在基于细胞的实验中发现了一种名为KAN0439834的小分子化合物，它似乎针对ROR1的酪氨酸激酶结构域，抑制wnt5a诱导的ROR1磷酸化，从而导致下游信号蛋白SRC、AKT、PKC和MAPK失活。它可以抑制CLL和胰腺癌细胞的生存。
目前的研究表明，ROR1是开发治疗部分实体瘤和血液瘤的一个很好的靶点。针对该靶点的研究主要包括ADC药物，单克隆抗体，CAR-T疗法，以及小分子抑制剂。此外，通过microRNAs和siRNA靶向ROR-1的治疗呀在研究中。参考资料：
[1] Zhao Yuming, Zhang Dengyang, Guo Yao et al. Tyrosine Kinase ROR1 as a Target for Anti-Cancer Therapies. [J] .Front Oncol, 2021, 11: 680834. [2] Karvonen Hanna, Barker Harlan, Kaleva Laura et al. Molecular Mechanisms Associated with ROR1-Mediated Drug Resistance: Crosstalk with Hippo-YAP/TAZ and BMI-1 Pathways. [J] .Cells, 2019, 8: undefined. [3] Vaisitti Tiziana, Arruga Francesca, Vitale Nicoletta et al. ROR1 targeting with the antibody-drug conjugate VLS-101 is effective in Richter syndrome patient-derived xenograft mouse models. [J] .Blood, 2021, 137: 3365-3377. [4] NBE-Therapeutics官网，https://www.nbe-therapeutics.com/pipeline [5] Oncternal Therapeutics官网，https://www.oncternal.com/pipeline [6] Amin Kamrani, Amir Mehdizadeh, Majid Ahmadi, Leili AghebatiMaleki & Mehdi Yousefi (2019): Therapeutic approaches for targeting receptor tyrosine kinase like orphan receptor-1 in cancer cells, Expert Opinion on Therapeutic Targets [7] NovalGen官网，https://www.novalgen.com/pipeline/